新冠肺炎核酸檢測PCR實驗室

　　通常醫(yī)院檢驗科和病理科等科室使用的實驗室為生物安全二級（BSL-2）實驗室。但新冠病毒核酸檢測用PCR實驗室則不同，《醫(yī)療機構發(fā)熱門診臨床實驗室能力建設專家共識（2020 版）》說明：對于用于新冠病毒檢測的PCR實驗室（以下簡稱“PCR實驗室”）選址宜設置在發(fā)熱門診內(nèi)，且建筑標準宜滿足加強型醫(yī)學BSL-2實驗室標準。

　　《醫(yī)學生物安全二級實驗室建筑技術標準》T/CECS 662-2020則對加強型醫(yī)學BSL-2實驗室建筑技術要求進行了規(guī)定?！夺t(yī)療機構臨床基因擴增檢驗實驗室工作導則》對PCR實驗室布局和流程進行了明確規(guī)定。

　　《關于印發(fā)醫(yī)療衛(wèi)生機構檢驗實驗室建筑技術導則（試行）的通知》則對檢驗實驗室建筑技術做出了整體要求。下面結合上述四部規(guī)范相關要求和實際建設的PCR實驗室案例對建設要點進行梳理

   一、1PCR實驗室應合理選址和布局

　　標準的PCR實驗室一般分為四個區(qū)，一區(qū)為試劑準備區(qū)，二區(qū)為標本制備區(qū)，三區(qū)為PCR擴增區(qū)，四區(qū)為產(chǎn)物分析區(qū)。為避免交叉污染，進入各個工作區(qū)域必須嚴格遵循單一方向進行，即只能從試劑貯存和準備區(qū)→標本制備區(qū)→擴增反應混合物配制和擴增區(qū)→擴增產(chǎn)物分析區(qū)。各實驗區(qū)之間的試劑及樣品傳遞應通過傳遞窗進行。場地一般要求在80平米以上，此標準PCR實驗室可開展包括新冠病毒在內(nèi)的常規(guī)分子檢測項目。而如今市面上絕大部分新冠病毒檢測試劑盒是在熒光定量PCR平臺上開發(fā)的，因此沒有產(chǎn)物分析區(qū)也不會影響新冠病毒的檢測，60-80平米的場地就能滿足要求，但是其他如基于一代測序與基因芯片的檢測項目就無法開展。

　　PCR實驗室應合理規(guī)劃檢驗人員

　　PCR實驗室標本制備室的生物安全要求最高，檢驗人員進入該區(qū)域緩沖間前需要在更衣室穿防護服，實驗結束后在緩沖間脫掉防護服，因此需要設置更衣室和合理規(guī)劃進出實驗室動線。

　二、PCR實驗室氣流組織應符合定向氣流原則

　　氣流組織應有利于室內(nèi)氣流由被污染風險低的空間向被污染風險高的空間流動，最大限度減少室內(nèi)回流與渦流。通風空調系統(tǒng)應保證各工作區(qū)的空氣不產(chǎn)生交叉污染。

　　實驗室的空氣流向可按照試劑儲存和準備區(qū)→標本制備區(qū)→擴增區(qū)→擴增產(chǎn)物分析區(qū)進行，防止擴增產(chǎn)物順空氣氣流進入擴增前的區(qū)域。

　　標準制備區(qū)要保持負壓

　　標本制備區(qū)為實驗室核心工作區(qū)，其主要進行的操作為臨床標本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、貯存及其加入至擴增反應管和測定RNA時cDNA的合成。取樣時病毒還未滅活，且在取樣操作時，容易造成氣溶膠擴散。為保護人員安全，必須在生物安全柜內(nèi)操作，防止標本氣溶膠的擴散。此后，標本經(jīng)過滅活處理，使病毒蛋白不再有生理活性，失去感染、致病和繁殖能力，使操作人員在對樣本進行檢測時相對安全，但是病毒蛋白的基因序列并沒有受到影響。后續(xù)操作時主要防止含有病毒核算的氣溶膠污染造成“假陽性”現(xiàn)象。因此，該區(qū)會產(chǎn)生污染源物，該區(qū)對緩沖間和試劑準備室保持負壓，負壓值小于擴增分析室。

　　三、核酸檢測實驗室建設的幾個關鍵點

　　1、平面布局：不論是組合式還是分散式布置的PCR實驗室，各功能房間均宜設置獨立緩沖間。

　　2、區(qū)域空氣流向：為避免交叉污染，PCR實驗室空氣流向必須嚴格遵循單一方向進行，即只能從試劑貯存和準備區(qū)→標本制備區(qū)→擴增反應混合物配制和擴增區(qū)→擴增產(chǎn)物分析區(qū)。

　　3、通風空調：為避免交叉污染，各功能用房內(nèi)空氣不能摻混?；旌鲜絇CR實驗室應采用新風直流空調系統(tǒng)，當采用新風系統(tǒng)有困難時，各區(qū)域的空氣只能在自己的房間內(nèi)循環(huán)。

　　4、生物安全：按照新型冠狀病毒實驗室生物安全指南（第二版）的規(guī)定，2019-nCoV病原體暫按照第二類病原微生物進行管理，則樣本植被區(qū)宜為負壓或加強型P2實驗室，核酸操作應在生物安全柜內(nèi)進行。

　　關鍵技術措施包括：

　　*絕對負壓（避免室內(nèi)潛在污染外泄）

　　*氣流組織（室內(nèi)定向流，從低污染風險區(qū)流向高污染風險區(qū)）

　　*排風無害化處理（高效過濾、高空排放）

　　四、核酸檢測實驗室氣流組織建議

　　1、氣流組織宜采用上送下排，送風口和排風口布置應使室內(nèi)氣流停滯的空間降低到最小程度。

　　2、在生物安全柜操作面或其他有氣溶膠操作地點的上方附件不得設送風口

　　3、高效過濾器排風口應設在室內(nèi)被污染風險最高的區(qū)域，單向布置，不得有障礙；

　　4、不能以回（排）風夾墻代替排風直管，排風高效過濾裝置與排風總管的連接必須全部是實體風管。